生物 分裂泛素化酵母双杂交技术

传统的酵母双杂交,诱饵和猎物必须要具有NLS,才能进入核内激活报告基因。对于原先的胞质蛋白,可以与NLS融合表达,但对于膜蛋白却束手无策。
新一代分裂泛素化酵母双杂交,将一个泛素分子分成NUb和CUb两部分,CUb融合转录因子TF。
随后,将诱饵连接CUb,猎物连接NUb。一旦诱饵和猎物直接互作,NUb和CUb合而为完整的Ub就可以招募来蛋白酶体,切掉TF入核,激活报告基因。
Chicken曾经介绍过研究孤儿受体的PRESTO-Tango,为何不采用和Tango一样的策略呢?首先,直接将蛋白酶与目标蛋白融合本身就易干扰目标蛋白的相互作用。Tango是基于对GPCR有着非常清楚的认识才开发的,而人们需要一种可以研究未知蛋白的方法。其次,新融合一个蛋白酶,效率肯定不如利用细胞内原有的Ub系统。
Tango是专门研究哺乳动物GPCR的,应药物开发的需求而生,在广谱性方面肯定不如分裂泛素,却能更精确的模拟和预测药物对人体的作用。
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